2型PRRSV N蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定

摘要

为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV）N蛋白的单克隆抗体，用原核表达系统表达并纯化后的2型PRRSV毒株的N蛋白免疫BALB/c小鼠，利用杂交瘤技术将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，通过间接ELISA和间接免疫荧光（IFA）对杂交瘤细胞进行鉴定，使用有限稀释法对阳性杂交瘤细胞进行亚克隆筛选。结果显示，成功获得1株单克隆抗体细胞株4A7。Western blot和IFA结果表明，该单克隆抗体能够准确识别1型和2型PRRSV的N蛋白。同时，通过原核表达系统对N蛋白基因进行截短表达，利用Western blot试验筛选出4A7识别的B细胞抗原表位的氨基酸序列为⁵¹EKPHF⁵⁵。在不同毒株的N蛋白基因序列中对该表位的氨基酸进行比对，发现单克隆抗体4A7识别的抗原表位⁵¹EKPHF⁵⁵与1型PRRSV毒株中3个亚型、2型PRRSV毒株中9个谱系的序列无氨基酸差异，具有较高的保守性。研究结果为研发PRRSV诊断试剂盒和新型疫苗奠定了理论基础。

关键词

PRRSV / 核衣壳蛋白 / 单克隆抗体 / 抗原表位