牛源诺卡菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用

赵岩, 任美奕, 仝静迪, 苏娅澜, 宋德源, 姜国均, 程佳, 高健, 刘明超

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.01.06

中国兽医学报 ›› 2025, Vol. 45 ›› Issue (01) : 39 -45. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.01.06

牛源诺卡菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用

赵岩, 任美奕, 仝静迪, 苏娅澜, 宋德源, 姜国均, 程佳, 高健, 刘明超

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摘要

诺卡菌（Nocardia）是一种革兰阳性菌，能感染奶牛乳腺引起乳房炎，导致奶牛乳腺组织出现化脓性肉芽肿病变等临床症状。为建立一种快速而准确的牛源诺卡菌检测方法，通过对NCBI上已登记的诺卡菌16S rRNA基因序列进行比对，筛选出一段保守序列，并针对该序列设计了1对引物及TaqMan荧光定量探针。经过验证，结果显示本研究建立的TanMan荧光定量PCR检测方法的Ct值与重组质粒在1×10¹⁰～1×10～2拷贝/μL范围内具有良好的线性关系，其回归方程为y=-3.536x+43.78,相关系数R²=0.997 5,斜率为-3.536,扩增效率（E）=91%,且满足90%