基于转录组学测序研究白屈菜碱缓解H₂O₂诱导IPEC-J2细胞炎症损伤的作用机制

摘要

将处于对数生长期的猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）分为空白组（K组）、H₂O₂组（S组）和白屈菜碱（chelidonine）组（L组）,每组设3个重复样本。L组给予含2.5 mg/L白屈菜碱进行预处理，24 h后，S组和L组给予含1 mg/L的完全培养基，培养12 h后，提取各组细胞的总RNA,构建测序文库，并对组装数据进行功能注释、差异基因分析以及GO和KEGG富集分析。采用qPCR法验证关键差异基因的表达情况，ELISA法检测白屈菜碱对IPEC-J2细胞通透性的影响。结果显示，测序数据的质控合格，样本间相关性良好。GO功能注释结果表明，白屈菜碱的干预作用主要涉及细胞氧化应激反应、有丝分裂周期G2/M转变调控等生物学过程，与跨膜转运活性等分子功能密切相关。KEGG富集分析结果显示，IPEC-J2细胞经H₂O₂处理后，差异表达基因（DEGs）主要富集于p53信号通路、补血和凝血级联反应、FoxO信号通路等多种信号通路，而白屈菜碱预处理后，DEGs主要富集在TNF信号通路、突触囊泡循环、IL-17信号通路等炎症相关信号通路。qPCR验证结果与测序结果一致。白屈菜碱还能显著抑制LDH释放、升高GLN含量、降低DOA含量。结果表明，白屈菜碱可以通过调控TNF信号通路等炎症相关通路，降低细胞通透性，缓解H₂O₂诱导的IPEC-J2细胞炎症损伤。

关键词

IPEC-J2细胞 / 白屈菜碱 / H₂O₂ / 炎症 / 转录组测序