传染性喉气管炎病毒RAA检测方法的建立

摘要

为建立一种快速、高效、灵敏的传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus, ILTV)检测方法。提取ILTV的DNA作为模板，通过条件优化、敏感性和重复性分析，建立针对ILTV的重组酶介导的等温扩增(RAA)荧光检测方法，同时使用禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)、传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus, IBV)、新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)的核酸进行检测，验证此方法的特异性；最后利用此方法对采集自河北省多家规模化养鸡场的59份临床样本进行检测，并与国家标准中的实时荧光定量(qPCR)和PCR方法进行对比分析。结果显示，本研究建立的RAA检测方法，其反应体系为缓冲液25.0μL、引物2.1μL、探针0.6μL、乙酸镁5.0μL、模板5.0μL,反应温度为39℃,扩增时间为20 min以内；该方法的灵敏度为10～1 copies/μL,特异性检测100%;对59份临床样本检测结果显示，RAA荧光法与qPCR法均检出17份阳性，PCR法检出12份，RAA(荧光法)检出率与实时荧光定量与qPCR一致，高于PCR检测法。结果表明：RAA荧光法检测时间短，并有较好的特异性与灵敏度，可用于ILTV的快速检测。

关键词

传染性喉气管炎 / 重组酶 / RAA