耐药基因bla_NDM、mcr-1和cfr三重TaqMan qPCR检测方法的建立及应用

摘要

为实现同时检测bla_NDM、mcr-1和cfr 3种耐药基因的方法。通过构建质粒标准品、对引物及探针设计和优化反应体系及条件，成功建立bla_NDM、mcr-1和cfr三重荧光定量PCR检测方法。该方法能特异性地检出bla_NDM、mcr-1和cfr,而对其他耐药基因均不能检出；3个耐药基因标准曲线的相关系数（R²）均大于0.999,变异系数（Cv）均低于1%;质粒标准品最低检出限值均为10～2 copies/μL。使用建立的方法对800份细菌样本进行检测，结果显示，含耐药基因mcr-1样本32份、只含耐药基因bla_NDM样本40份、只含耐药基因cfr样本2份；同时含有耐药基因mcr-1和bla_NDM的样本8份，未检出同时携带3种耐药基因的细菌样本。以上结果证实，本研究建立的三重荧光定量PCR方法具有灵敏性高、特异性强及稳定性好的优点，适用于临床上快速检测bla_NDM、mcr-1和cfr 3种耐药基因，为细菌多重耐药基因的检测和控制提供技术支持。

关键词

bla_NDM / mcr-1 / cfr / 耐药基因 / 多重荧光定量PCR