青藏高原4省牦牛源肠球菌分离鉴定及其毒力耐药基因与生物被膜检测

摘要

为了解青藏高原牦牛源肠球菌流行情况及其耐药性、毒力基因特点、生物被膜黏附能力情况，从青藏高原4省区(西藏自治区、四川省、甘肃省、青海省)采集新鲜牦牛粪样346份，奶样311份，共计657份，对其进行细菌分离鉴定，16S rDNA基因检测并构建系统进化树。使用PCR方法对分离菌株进行耐药、毒力基因检测，利用18种抗菌药物进行药敏试验；采用改良半定量结晶紫染色法确定分离菌株生物被膜黏附能力。结果显示，肠球菌总分离率为32.27%,其中四川省最高，达60.23%,其次甘肃省、青海省和西藏自治区，分别为42.70%、23.47%和18.31%。从样品种类来看，粪样分离率为36.71%,奶样为27.33%。经PCR扩增得到约1 400 bp目的条带，选取5株菌株进化分析单独聚成一簇。212株分离菌对克林霉素、庆大霉素、利奈唑胺、利福平、链霉素产生较高耐药性，并存在多种耐药现象，占60.85%。12种耐药基因只有5种被检测出，分别为erm(B)、tet(L)、tet(O)、tet(M)和ant(6)-Ia。13种毒力基因均有在肠球菌中检测出，其中cpd检出率为95.75%,gelE为91.98%,efaA为86.79%,asal为86.32%,其余的在5.19%～55.66%之间。而奶源肠球菌中暂未检测出fsr毒力基因。分离菌中强黏附能力占3.30%,弱黏附能力占48.58%,无黏附能力占48.11%。综上研究揭示了牦牛源肠球菌流行情况、耐药基因和毒力基因携带情况、生物被膜表型相关性，为掌握青藏高原牦牛源肠球菌研究数据奠定了基础。

关键词

青藏高原 / 牦牛 / 肠球菌 / 毒力基因 / 耐药性 / 生物被膜