细粒棘球绦虫3 d幼虫cDNA表达文库的构建及鉴定

吴小霞; 刘晓雷; 刘明远; 孙树民; 赵永军; 丁静

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.02.18

中国兽医学报 ›› 2025, Vol. 45 ›› Issue (02) : 305 -311. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.02.18

细粒棘球绦虫3 d幼虫cDNA表达文库的构建及鉴定

吴小霞, 刘晓雷, 刘明远, 孙树民, 赵永军, 丁静

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摘要

构建细粒棘球绦虫3 d幼虫cDNA表达文库，并进行初步鉴定。从新鲜带有包囊的患病羊源肝脏内分离采集原头蚴，人工经口感染实验犬，第3天剖检取幽门后小肠约1.5 m,沿纵轴将其剪开置38～40℃生理盐水中稍加摆动使虫体自行脱落，收集细粒棘球绦虫3 d幼虫。采用TRIzol试剂提取总RNA,PolyATtract^? mRNA Isolation Systems分离纯化mRNA,反转录合成cDNA,加5′接头后与pBluescript sk-载体连接经电转导入大肠杆菌，构建细粒棘球绦虫3 d幼虫cDNA表达文库。构建的文库初始库容量为1.15×10⁷CFU/mL,扩增后文库的滴度为1×10¹⁰ CFU/mL,重组率为100%,插入片段长度平均为1.0～1.2 kb。构建的cDNA表达文库库容量及插入片段大小合适，有望用于细粒棘球绦虫终末宿主犬疫苗候选基因及诊断抗原分子的筛选。