基于HN蛋白的牛副流感病毒3型间接ELISA检测方法的建立及初步应用

摘要

为建立牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)血清学检测方法，本试验对BPIV3的HN、NP、F、P蛋白进行原核表达、纯化，筛选最适蛋白包被抗原，建立间接ELISA检测方法。结果显示，成功表达了BPIV3的4种重组蛋白rHN、rNP、rF和rP;棋盘滴定结果显示，rHN蛋白作为包被蛋白具有最高的P/N值，因此用于后续方法建立。摸索间接ELISA的最适反应条件：抗原包被质量浓度为0.5 mg/L,37℃1.5 h; 5%脱脂牛奶，4℃过夜封闭；血清1∶50稀释，37℃孵育1 h;二抗稀释度为1∶10 000,37℃孵育0.5 h;底物反应条件为37℃12 min。特异性试验结果显示，所建立的方法能够特异性识别BPIV3抗体阳性血清，且灵敏度达到1∶800,批内与批间重复性的检测中变异系数均小于10%,与SVANOVIR试剂盒检测同一批样品的总符合率为92.22%。应用该方法对河北地区192份血清样品进行检测，血清中BPIV3抗体阳性率为66.15%。结果表明，本试验构建的BPIV3抗体间接ELISA检测方法适用于临床大规模血清学调查。

关键词

牛副流感病毒3型(BPIV3) / HN蛋白 / 间接ELISA / 原核表达