牛副流感3型病毒样颗粒的制备及免疫原性评价

摘要

针对牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)的基质蛋白(M)和血凝素-神经氨酸酶(HN)基因进行密码子优化并构建重组穿梭质粒Dual-M+HN;使用杆状病毒表达系统制备BPIV3病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs),并采用Western blot、间接免疫荧光和电镜对其进行验证；将验证成功的VLPs与MF59佐剂和CpG-ODN免疫增强剂混合通过肌注方式免疫小鼠。通过检测小鼠血清特异性抗体、中和抗体和血凝抑制抗体来评估BPIV3 VLPs的免疫效果。结果显示，优化后的M和HN蛋白基因密码子适应指数(codon adaptation index, CAI)分别为0.96和0.95,CG含量分别达到54.1%和53.1%;构建的重组质粒转化至DH10Bac进行蓝白斑筛选，将验证正确的重组杆粒转染至Sf9细胞，获得杆状病毒pFastBac-M+HN,电镜下观察可见直径约180 nm的BPIV3 VLPs; IFA和Western blot试验均证明目的蛋白的成功表达并具有生物学活性；通过蛋白优化发现感染剂量MOI=5时蛋白表达量最高；将50μg VLPs与MF59佐剂和CpG-ODN混合后肌注方式免疫小鼠，结果显示VLPs免疫组在首免2周时抗体开始上升，在二免后21 d时达到最高，平均IgG抗体滴度为1∶40 228,中和抗体滴度平均为1∶298,血凝抑制抗体滴度为1∶549,达到灭活苗水平(P≥0.05),表明本试验制备的VLPs能诱导机体产生体液免疫反应。结果表明，本试验成功制备了能自组装表达BPIV3 HN和M蛋白的VLPs,并能诱导小鼠机体产生体液免疫反应，为后续BPIV3 VLPs疫苗研究奠定了基础。

关键词

牛副流感病毒3型 / 基质蛋白(M) / 血凝素-神经氨酸酶(HN) / 病毒样颗粒 / 免疫原性