牛纽布病毒病毒样颗粒的制备及对小鼠的免疫效果评价

摘要

针对牛纽布病毒(bovine nebovirus, BNeV) VP1基因进行密码子优化并构建重组质粒pFastBac-Dual-VP1,使用杆状病毒表达系统制备BNeV-VP1病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs)。采用Western blot、间接免疫荧光和电镜对其进行鉴定。将验证正确的VLPs与MF59佐剂、CpG-ODG免疫增强剂混合后免疫小鼠并评估其免疫效果。结果显示，优化后的VP1基因密码子适应指数(codon adaptation index, CAI)为0.93,GC含量为60.4%;将构建的重组质粒转化至DH10Bac进行蓝白斑筛选，验证成功后转染至SF9细胞，获得重组杆状病毒Baculo-BNeV-VP1;电镜下可观察到直径在35～40 nm的BNeV VLPs; IFA和Western blot试验均证明VP1蛋白可以成功表达并具有生物学活性；通过蛋白优化发现感染剂量MOI=0.5时蛋白表达量最高；将50μg VLPs与MF59佐剂和CpG-ODN混合后，以肌肉注射方式免疫小鼠，结果显示VLPs免疫组在首免后7 d产生IgG抗体，且抗体滴度逐步增加，于28 d达到峰值(1∶102 400),35 d时有所下降，但仍保持较高水平；阻断效价BT50最高为640,可诱导小鼠产生BNeV VP1特异性阻断抗体。结果表明，利用杆状病毒表达系统表达了BNeV的VP1蛋白，并成功构建了BNeV VLPs,其能诱导小鼠机体产生体液免疫反应，为后续BNeV疫苗研究提供了参考。

关键词

牛纽布病毒 / VP1蛋白 / 病毒样颗粒 / 免疫原性 / 小鼠