表达GoAstV-2 Cap蛋白的重组FAdV-4的构建与鉴定

李星雨; 李岩; 杨盼盼; 刘俊杰; 相梦佳; 朱玉涛; 邱路遥; 乔麒龙; 张伯顺; 卜德新; 韩城昊; 于春梅; 丛雁方; 王增; 李建丽; 王白玉; 赵军

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.03.07

中国兽医学报 ›› 2025, Vol. 45 ›› Issue (03) : 443 -448+513. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.03.07

表达GoAstV-2 Cap蛋白的重组FAdV-4的构建与鉴定

李星雨, 李岩, 杨盼盼, 刘俊杰, 相梦佳, 朱玉涛, 邱路遥, 乔麒龙, 张伯顺, 卜德新, 韩城昊, 于春梅, 丛雁方, 王增, 李建丽, 王白玉, 赵军

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摘要

为构建表达鹅星状病毒基因2型(GoAstV-2)衣壳蛋白(Cap)的重组禽腺病毒4型(FAdV-4),本研究将GoAstV-2的Cap基因表达盒插入到含有FAdV-4感染性克隆p15A-cm-FAdV4-HNJZ中FAdV4基因组的1 966 bp自然缺失区，将获得的重组感染性克隆p15A-cm-FAdV4-HNJZ-Cap/GoAstV-2利用限制性内切酶线性化后转染鸡肝癌细胞系(chicken hepatoma cell line, LMH),拯救出表达Cap蛋白的重组病毒rFAdV4-Cap/GoAstV-2。将重组病毒在LMH细胞中连续传至第15代，提取重组病毒基因组DNA,用插入位点两侧的鉴定引物进行PCR和利用抗Cap蛋白多克隆抗体进行间接免疫荧光试验和Western blot对重组病毒进行鉴定，同时对重组病毒在LMH细胞中的复制动态进行了研究。结果显示，GoAstV-2的Cap基因能够稳定存在于重组病毒rFAdV4-Cap/GoAstV-2基因组中，而且获得稳定表达；重组病毒具有良好的体外复制能力。本研究所制备的重组病毒rFAdV4-Cap/GoAstV-2为研制防控鹅FAdV-4和GoAstV-2混合感染的新型高效二联灭活疫苗奠定了基础。