基于同源重组的猪肺炎支原体p97基因突变株的构建

摘要

采用pGEM^?-T载体作为骨架，通过质粒双酶切和连接以及全基因合成的方法，向载体质粒中插入猪肺炎支原体（Mesomycoplasma hyopneumoniae,Mhp）的oriC序列，获得pGEM^?-Mhp-oriC-p97重组穿梭质粒，以实现质粒在Mhp中的复制；插入螺原体启动子及嘌呤霉素抗性基因用于重组单克隆的筛选；插入p97的上、下游同源臂用于同源重组的启动；插入大肠杆菌recA基因用于提高同源重组效率。然后，将pGEM^?-Mhp-oriC-p97重组穿梭质粒通过电转化或化学转化递送入Mhp中，利用嘌呤霉素抗性基因及p97目的基因进行基因缺失株的筛选。结果显示，构建了一种能够同时在Mhp及大肠杆菌中复制的穿梭质粒pGEM^?-Mhp-oriC-p97,该质粒的转化能实现嘌呤霉素基因、recA基因在Mhp中的表达及p97基因的变异，初步获得了p97基因突变株。结果表明，建立了一种利用同源重组原理实现Mhp基因编辑的工具，为Mhp致病机制研究工具的开发奠定了基础。

关键词

猪肺炎支原体 / 基因突变株 / p97基因 / 同源重组