基于同源重组的猪肺炎支原体p97基因突变株的构建

韦艳娜; 王吉英; 谢欢; 李志强; HASSAN Z.A.Ishag; 谢星; 徐彬; 熊祺琰; 冯志新; 邵国青; 于岩飞

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.03.11

中国兽医学报 ›› 2025, Vol. 45 ›› Issue (03) : 473 -481. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.03.11

基于同源重组的猪肺炎支原体p97基因突变株的构建

韦艳娜, 王吉英, 谢欢, 李志强, HASSAN Z.A.Ishag, 谢星, 徐彬, 熊祺琰, 冯志新, 邵国青, 于岩飞

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摘要

采用pGEM^?-T载体作为骨架，通过质粒双酶切和连接以及全基因合成的方法，向载体质粒中插入猪肺炎支原体（Mesomycoplasma hyopneumoniae,Mhp）的oriC序列，获得pGEM^?-Mhp-oriC-p97重组穿梭质粒，以实现质粒在Mhp中的复制；插入螺原体启动子及嘌呤霉素抗性基因用于重组单克隆的筛选；插入p97的上、下游同源臂用于同源重组的启动；插入大肠杆菌recA基因用于提高同源重组效率。然后，将pGEM^?-Mhp-oriC-p97重组穿梭质粒通过电转化或化学转化递送入Mhp中，利用嘌呤霉素抗性基因及p97目的基因进行基因缺失株的筛选。结果显示，构建了一种能够同时在Mhp及大肠杆菌中复制的穿梭质粒pGEM^?-Mhp-oriC-p97,该质粒的转化能实现嘌呤霉素基因、recA基因在Mhp中的表达及p97基因的变异，初步获得了p97基因突变株。结果表明，建立了一种利用同源重组原理实现Mhp基因编辑的工具，为Mhp致病机制研究工具的开发奠定了基础。