基因Ⅰ型日本脑炎病毒GX毒株感染性克隆的构建

颜梦学, 叶静, 曹胜波, 熊俊垚

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.03.12

中国兽医学报 ›› 2025, Vol. 45 ›› Issue (03) : 482 -488. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.03.12

基因Ⅰ型日本脑炎病毒GX毒株感染性克隆的构建

颜梦学, 叶静, 曹胜波, 熊俊垚

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摘要

通过RT-PCR方法从基因Ⅰ型（GⅠ）日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）GX株中扩增覆盖全长cDNA的3段基因片段，将3个基因片段依次克隆到pBR322载体上以获得感染性克隆质粒pGX,测序正确后将该感染性克隆质粒与pCAGGS-T₇聚合酶真核表达质粒共转染至BHK-21细胞中进行病毒的拯救。间接免疫荧光和噬斑试验结果显示，成功拯救GⅠJEV rGX;噬斑试验和小鼠感染试验结果显示，拯救的病毒rGX与野生型病毒GX具有相似的复制能力与致病性。结果表明，成功构建了GⅠJEV GX毒株感染性克隆。