犬NT-proCNP单链抗体库的构建及1株单链抗体的筛选与免疫活性检测

摘要

首先采用原核表达制备氨基末端C型钠尿肽原(NT-proCNP)并对新西兰大白兔进行免疫。当兔血清效价达到预期后，提取其脾细胞总RNA,并反转录为cDNA。以cDNA为模板，利用简并引物分别对兔源抗体轻链可变区(VL)以及重链可变区(VH)基因进行扩增。通过重叠延伸PCR法将VL和VH拼接成完整的噬菌体单链抗体(scFv)片段，再将scFv与嗜菌粒pComb3XSS连接并电转化至感受态E.coli TG1中以构建抗NT-proCNP兔源单链抗体免疫文库。对该抗体库进行4轮富集淘筛，并从中筛选出特异性单链抗体。最后通过原核表达系统对单链抗体进行可溶性表达并检测其免疫反应活性。结果表明，本研究基于噬菌体展示技术成功筛选到1株具有良好抗原结合活性且符合scFv基因特征的单链抗体scFv-1-CNP,为进一步探究单链抗体在NT-proCNP检测中的应用提供了研究思路。

关键词

氨基末端C型钠尿肽原 / 单链抗体 / 噬菌体展示