含金属硫蛋白3内置佐剂的破伤风毒素C片段重组抗原的构建及其免疫原性分析

摘要

将金属硫蛋白3 （MT-3）基因序列与破伤风毒素C片段（HC）基因序列通过连接子进行融合，构建pET30a-MT-3-HC重组质粒，转化至大肠杆菌E.coli BL21（DE3）感受态细胞中，重组质粒经双酶切鉴定。诱导M₃C重组蛋白表达，经SDS-PAGE和Western blot鉴定，Ni-NTA亲和层析纯化。将PBS、HC、TT（破伤风类毒素）、M₃C、M₃C+CpG（复合佐剂） 5组疫苗肌肉注射小鼠，每隔7 d进行1次免疫，共3次，定期从尾静脉采集血样。采用ELISA法测定血清中特异性IgG抗体滴度的变化，并在第28天测定抗体分型（IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgM）和细胞因子（IL-4、IFN-γ）水平。结果显示，pET30a-MT-3-HC重组质粒构建成功，超声破碎诱导的细菌培养上清液中M₃C重组蛋白高表达，纯化后观察到单条带；ELISA结果显示，M₃C+CpG组特异性IgG抗体滴度在第3次免疫后14 d达到峰值，为3.54×10～5,分别是HC组、TT组和TT组的141、70和6.6倍；抗体分型分析显示，与PBS、HC和TT组相比，M₃C组和M₃C+CpG组特异性抗体分型滴度显著升高（P<0.05）,其中M₃C组IgG1/IgG2a比值大于1,而M₃C+CpG组IgG1/IgG2a比值约为1;M₃C组和M₃C+CpG组血清中IFN-γ和IL-4浓度也显著高于其他试验组（P<0.05）。结果表明，含有MT-3内置佐剂和破伤风毒素C片段的抗原成功表达，并表现出较强的免疫原性，为这种重组疫苗的研制奠定了试验基础。

关键词

金属硫蛋白3 / 内置佐剂 / 重组疫苗 / 破伤风毒素C片段