硬脂酸通过CD36影响酮病奶牛CD4⁺T细胞IL-17的表达

摘要

采集健康、酮病奶牛外周血液并分离出CD4⁺ T细胞，Western blot检测脂质合成相关蛋白脂肪酸合成酶（fatty acid synthase, FASN）、乙酰辅酶A羧化酶1（acetyl coenzyme A carboxylase 1,ACC1）、白细胞分化抗原36（cluster of differentiation 36,CD36）及钙库操纵性钙离子内流（store-operated calcium entry, SOCE）相关蛋白ORAIl、ORAI2、ORAI3、STIM1、STIM2表达；流式细胞术检测IL-17表达。从1日龄犊牛脾脏分离CD4⁺ T细胞用于体外培养，细胞处理分为阴性对照siRNA处理组（Ctrl组）、沉默CD36（siCD36）组、硬脂酸（stearic acid, SA）组、SA+siCD36组。使用75 pmol/L阴性对照siRNA转染Ctrl组和SA组细胞48 h,然后用200μmol/L SA刺激SA组细胞24 h;使用75 pmol/L CD36 siRNA转染siCD36组和SA+siCD36组细胞48 h,然后用200μmol/L SA刺激SA+siCD36组细胞24 h。Western blot检测FASN、ACC1、CD36、钙释放激活钙调节因子1（calucium release-activated calcium channel protein 1,CRCM1,也称ORAI1）,ORAI2、ORAI3、基质相互作用分子1（slromal interaction molecule 1,STIM1）、STIM2蛋白表达；流式细胞术检测IL-17表达。结果显示，与健康奶牛相比，酮病奶牛外周血CD4⁺ T细胞中IL-17表达显著升高（P<0.01）;并上调了FASN、CD36、STIM1（P<0.05）及ACC1、ORAI2、ORAI3、STIM2的蛋白水平（P<0.01）。体外试验结果显示，相比于Ctrl组，SA组上调了CD36、ACC1、ORAI3（P<0.05）以及FASN、STIM1的蛋白表达（P<0.01）,IL-17表达显著升高（P<0.05）;相比于SA组，SA+siCD36组下调了STIM1、ORAI1（P<0.05）及CD36、ACC1、FASN、ORAI2的蛋白表达（P<0.01）,IL-17表达降低（P<0.05）。结果表明，SA通过CD36促进酮病奶牛CD4⁺T细胞脂质合成并激活SOCE通道，促进IL-17表达。

关键词

硬脂酸 / CD36 / CD4⁺ T细胞 / IL-17 / 酮病 / 奶牛