猪流行性腹泻病毒S1蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

摘要

为了制备猪流行性腹泻病毒(procine epidemic diarrhea virus,PEDV) S1蛋白的单克隆抗体,本研究首先利用大肠杆菌表达系统和亲和层析法成功获得纯化的重组PEDV S1蛋白,免疫BALB/c小鼠后利用杂交瘤技术和间接ELISA方法制备并筛选阳性的杂交瘤细胞,最后利用体内诱生法制备腹水抗体。ELISA结果显示筛选到抗PEDV S1单克隆抗体的杂交瘤细胞株共有4株,并将其命名为E6、G3、H6、F2。4株杂交瘤细胞上清效价都达到1:6 400,选择抗体效价高、抗体分泌更稳定的单克隆抗体H6进行抗体类型鉴定,发现单抗H6为IgG1亚类,轻链为λ链,诱生小鼠腹水的抗体效价为1:10～6且与其他蛋白无交叉反应;Western blot结果显示单抗与重组S1蛋白PEDV QY2016和PEDV CV777毒株均在38 kDa处出现特异性条带;IFA结果也同时发现单抗与感染PEDV QY2016和PEDV CV777毒株的细胞反应出现绿色荧光信号;单克隆抗体H6的亲和常数为K=1.75×10～7 mol/L,说明H6株具有良好的亲和性,可用于后续诊断抗体的开发。综上,本研究成功制备了能够特异性识别PEDV S1蛋白的单克隆抗体,该抗体可用于PEDV的抗原检测,为PEDV检测方法的研究提供了重要试验材料。

关键词

猪流行性腹泻病毒 / S1蛋白 / 单克隆抗体