检测PEDV核酸的荧光RAA方法的建立及初步应用

摘要

旨在建立一种检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的重组酶介导等温核酸扩增(recombinase aided amplification,RAA)技术方法。基于对PEDV基因组的分析,筛选M基因的特异性序列作为检测靶标,设计扩增效率高、特异性好的RAA引物对和探针,通过荧光恒温检测仪实时监控扩增过程,结合免核酸提取技术,实现对PEDV核酸的快速、敏感和特异检测。结果表明,该方法具有较好的敏感性,最低检测限为8.86×10～1拷贝/μL;同时,该检测方法具有良好的特异性和重复性,不与猪传染性胃肠炎病毒、猪冠状病毒、猪圆环病毒等发生交叉反应。在37～41℃的恒温条件下,扩增曲线明显,表明该方法具有良好的温度适应性。本研究成功建立了检测PEDV的荧光RAA技术方法,有望用于PEDV的现场快速检测。

关键词

PEDV / 荧光RAA / M基因 / 免核酸提取