miR-142-5p过表达慢病毒载体的构建及对小鼠肠道上皮细胞的影响

摘要

为研究旋毛虫成虫期特异性蛋白Ts DNaseⅡ-7诱导的miR-142-5p上调对肠道上皮细胞的影响,构建miR-142-5p过表达慢病毒表达载体并注射至小鼠体内,观察小鼠结肠组织病理变化情况。将miR-142-5p基因连接绿色荧光慢病毒载体plenti CMV/TO eGFP Puro,测序无误后命名该重组载体为plenti-miR-142-5p。将重组质粒和包装辅助质粒共转染293T细胞,包装产生miR-142-5p过表达慢病毒载体(LV-miR-142-5p)。收取重组慢病毒悬液,利用超速离心沉淀法浓缩,Real-time PCR测定病毒滴度。将病毒悬液尾静脉注射6～8周龄BALB/c小鼠,解剖取其结肠组织进行HE染色并在显微镜下观察。结果显示miR-142-5p同源重组入plenti载体,测序结果与预期序列一致。plenti-miR-142-5p与包装辅助质粒共转染293T细胞,根据绿色荧光表达情况确认转染成功,Real-time PCR结果显示慢病毒滴度为1.23×10～9 IU/mL。小鼠结肠组织切片显示感染组结肠完整性受损,出现明显炎症反应。证明miR-142-5 p可诱导小鼠肠上皮细胞损伤。

关键词

miR-142-5p / 慢病毒 / 肠道上皮细胞