犬细粒棘球绦虫粪抗原诊断标志物筛选

摘要

旨在筛选特异性强、敏感性高的犬细粒棘球绦虫(Eg)粪抗原诊断标志物。采集羊源细粒棘球绦虫原头蚴人工感染犬,制备犬Eg阴性粪样和阳性粪样。盐析结合亲和层析纯化获得多克隆抗体、阴性粪抗原-多克隆抗体结合物和阳性粪抗原-多克隆抗体结合物,ELISA和Western blot检测3组样品,对3组样品进行LC-MS/MS检测和生物信息学分析,以阳性粪抗原-多克隆抗体结合物为处理组,多克隆抗体和阴性粪抗原-多克隆抗体结合物为对照组筛选处理组独有的唯一肽段。ELISA和Western blot检测显示仅阳性粪抗原-多克隆抗体结合物为阳性。根据LCMS/MS检测和生物信息学分析,共鉴定到171个蛋白,486条肽段;蛋白质定量分析筛选出86个差异蛋白;根据唯一多肽筛选出仅处理组存在唯一肽段蛋白的蛋白质11个,其中3个蛋白质与细粒棘球绦虫相关,分别为Dysferlin、Integrator complex 9和Diagnostic antigen gp50,此3个蛋白质分别为膜相关蛋白、INT复合体组成部分和诊断抗原。本研究初步筛选出3个候选犬Eg粪抗原诊断标志物,对进一步挖掘Eg诊断标准物质、筛选包虫病靶标基因和疫苗研制提供参考。

关键词

细粒棘球绦虫 / 多克隆抗体 / 抗原 / 特异性肽段 / 诊断标志物