双峰驼APOD的克隆、生物信息学分析及在附睾中的表达与定位

摘要

载脂蛋白D(apolipoprotein D,APOD)广泛存在于动物各组织,参与机体的生殖调控。为探究APOD在双峰驼附睾中的表达规律及其对精子成熟的调控作用,本试验以发情期及乏情期双峰驼附睾为材料,首先克隆APOD的编码序列(CDS)区全序列,利用ProParam、SOPMA、SWISS-MODEL和MEGA7.0等软件分析其理化特性,同时采用qRT-PCR、蛋白免疫印迹(Western blot)及免疫组织化学法(IHC)检测APOD在附睾中的表达及分布规律。克隆结果显示,APOD基因的CDS区长度为624 bp,编码207个氨基酸,双峰驼APOD序列与羊驼的核苷酸和氨基酸序列存在高度保守性,同源性近,与麋鹿的同源性最低。qRT-PCR结果显示,乏情期附睾头、体及尾APOD的mRNA水平显著高于发情期(P<0.01);Western blot结果显示,乏情期附睾头及附睾体的APOD蛋白表达与mRNA表达趋势相似,但乏情期附睾尾APOD的表达水平与mRNA表达水平相反(P<0.05)。H&E及IHC结果显示,发情期和乏情期附睾组织有明显差异,且APOD在附睾上皮细胞、平滑肌细胞、精子及结缔组织均有不同程度的阳性反应。结果提示APOD可能参与发情期及乏情期精子的成熟过程,为进一步探究APOD参与季节性发情的调控机制提供依据。

关键词

双峰驼 / 发情期 / 乏情期 / 附睾 / APOD