猪繁殖与呼吸综合征病毒环状RNA疫苗的构建及环化条件优化

摘要

为构建一种环化率高、便捷有效的环状RNA(circRNA)疫苗制备体系，本研究采用基于Ⅰ型内含子的内含子外显子置换(permuted intron exon, PIE)策略，构建了绿色荧光蛋白(EGFP) circRNA,并对体外转录后(IVT)、一次环化后(IVC1)、二次环化后(IVC2)的RNA进行了circRNA环化率的比较，在对circRNA进行纯化后将构建的circRNA体系应用于猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),基于PRRSV GP5蛋白构建了2种circRNA,并进行了体外表达评价。结果显示，IVC1 RNA与IVC2 RNA的EGFP circRNA环化率及蛋白表达效果相近，但均显著优于IVT RNA,纯化后的EGFP circRNA纯度可达74%,使用该制备体系构建的2种PRRSV GP5蛋白circRNA纯度分别为71%与64%,Western blot和间接免疫荧光结果显示2种circRNA均成功表达。结果表明，成功构建了一种操作简便、成本低廉且环化率高的circRNA制备体系，并基于该体系制备了2种PRRSV GP5蛋白circRNA候选疫苗，可实现高效表达，从而为动物circRNA疫苗开发及PRRSV新型候选疫苗的研制提供了理论依据。

关键词

circRNA疫苗 / 制备体系 / PRRSV疫苗 / 体外表达