TPCK胰酶对猪流行性腹泻病毒在Vero细胞上增殖的影响

摘要

旨在探究甲苯磺酰基-L-氨基联苯氯甲基酮（TPCK）胰酶对猪流行性腹泻病毒（PEDV）在Vero细胞上增殖规律的影响。试验通过在病毒增殖过程添加TPCK胰酶和常规胰酶，利用RT-qPCR技术，分析病毒吸附和入侵Vero细胞的变化规律，并通过生长曲线绘制、IFA鉴定和细胞活性检测，解析PEDV在Vero细胞上的复制能力变化。结果显示，TPCK胰酶和常规胰酶最适质量浓度分别为1、6 mg/L;PEDV含量随着TPCK胰酶和常规胰酶前处理时间延长呈下降趋势；在病毒增殖过程中添加不同胰酶对PEDV入侵Vero细胞无促进作用，在入侵4 h后，各组病毒粒子均逐渐增加；通过生长曲线绘制，发现TPCK胰酶组在24 h时病毒含量达到最高(lg TCID₅₀=（6.30±0.14）/0.1 mL),且此时产生的荧光强度高于常规胰酶组，36 h时病毒含量呈下降趋势。结果表明，TPCK胰酶对PEDV在Vero细胞上的增殖有更好的促进作用，为TPCK胰酶影响PEDV增殖作用机制进一步研究提供了理论依据，也为PEDV流行毒株的分离纯化提供了数据支撑。

关键词

TPCK胰酶 / 猪流行性腹泻病毒 / Vero细胞 / 增殖 / 入侵

基金资助

国家生猪技术创新中心先导科技资助项目(NCTIP-XD/B11); 国家动物疫病长期性观测监测资助项目(ZX06S2302)