旋毛虫泛素连接酶TP12446基因的活性鉴定及分析

摘要

筛选旋毛虫肌幼虫时期特异表达基因TP12446,预测其RNF家族属性，并对其理化性质及活性进行分析和鉴定。采用生物信息学方法预测TP12446蛋白的理化性质、结构等，利用体外泛素化反应验证其泛素连接酶活性，并通过qPCR和Western blot分析TP12446在旋毛虫不同时期的表达特性。结果显示，生物信息学分析表明TP12446蛋白由453个氨基酸组成，理论相对分子质量为51.48 kDa。且TP12446蛋白含信号肽并具有跨膜结构，属于分泌蛋白，主要定位于细胞质膜。TP12446蛋白结构分析表明二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲组成，且含有RING结构域和PA结构域。B细胞抗原表位预测显示该蛋白共有10个B细胞抗原表位。糖基化和磷酸化位点预测显示，TP12446蛋白含有38个潜在磷酸化位点。PPI互作蛋白预测显示，TP12446与Usp8、Tmem37、Otub1、Otub2、Ubox5及CD151等蛋白相互作用较强。qPCR和Western blot检测均表明，TP12446基因在肌幼虫时期呈高表达，体外泛素化反应验证了其E3泛素连接酶活性。结果表明，TP12446蛋白为疏水性分泌蛋白，具有E3泛素连接酶活性，可能参与调控细胞周期和细胞凋亡。

关键词

旋毛虫 / 泛素连接酶 / 生物信息学 / 活性鉴定