猪血凝性脑脊髓炎病毒S蛋白与DPP4受体结合的关键位点鉴定与分析

摘要

二肽基肽酶4(DPP4)是猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)刺突(S)蛋白的结合受体之一。为鉴定DPP4蛋白与PHEV S蛋白结合界面的关键氨基酸位点，并探究其突变对病毒感染的影响，本研究构建了猪源、鼠源、人源DPP4(pDPP4、mDPP4、hDPP4)与S蛋白截短体(S311-608、S13-298)重组质粒，将两者共转染HEK293T细胞，通过免疫共沉淀技术(CoIP)检测蛋白间的互作；同时，在PHEV非易感的HeLa细胞中过表达DPP4同源物并接种病毒，通过Western blot与RT-qPCR检测PHEV蛋白和基因表达。随后，利用点突变试剂盒对互作界面中重要的pDPP4氨基酸位点进行逐一突变构建突变型过表达质粒，并将突变型、野生型pDPP4分别与病毒S蛋白截短体共转染HEK293T细胞后接种PHEV,利用Western blot和RT-qPCR检测PHEV复制水平。结果显示，pDPP4、mDPP4与PHEV S蛋白结合作用显著强于hDPP4,且与hDPP4相比，pDPP4、mDPP4可显著促进PHEV复制。同时发现pDPP4糖基化位点突变可显著增强与PHEV S蛋白的相互作用，糖基化位点(N229、N321)突变能够显著促进PHEV感染。结果表明，DPP4糖基化修饰在S蛋白介导PHEV侵入靶细胞过程中发挥着重要的屏蔽作用。

关键词

猪血凝性脑脊髓炎 / 细胞受体 / 二肽基肽酶4 / S蛋白