猪A群轮状病毒VP8*蛋白多克隆抗体的制备及其中和抗体效价的测定

摘要

为探究仔猪重要腹泻病原猪A群轮状病毒(PoRVA)的VP8*蛋白作为亚单位疫苗靶标的可行性，本研究利用RT-PCR扩增了PoRVA P[13]和P[23]基因型毒株的VP8*基因，并将其连接至pET-28a(+)构建重组质粒pET-28a-XJWF1-VP8*-P[23]和pET-28a-ShXYW13-VP8*-P[13],随后转化至BL21(DE3)感受态细胞。利用亲和层析法纯化IPTG诱导表达的VP8*蛋白，并通过SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白的表达与纯化效果。将纯化的VP8*蛋白免疫小鼠，经过3次免疫后收集血清，进行交叉中和试验以评价VP8*蛋白免疫血清中和不同基因型毒株的能力。结果显示，本研究成功表达了可溶性的VP8*蛋白，SDS-PAGE和Western blot分析表明，纯化的VP8*蛋白以单体(27 kDa)和同源二聚体(54 kDa)形式存在。ELISA结果显示，用VP8*-P[13]和VP8*-P[23]免疫的小鼠在3次免疫后均产生了较高水平的抗体。血清交叉中和试验表明，PoRVA VP8*-P[13]和VP8*-P[23]免疫血清对同基因型毒株的中和滴度为1∶4 800～1∶19 200,显著高于对不同基因型毒株的中和滴度(1∶1 200),表明不同基因型毒株的VP8*蛋白具有一定的抗原保守性和明显的差异性。本研究获得的数据为进一步探索PoRVA VP8*蛋白的抗原结构以及研发新型亚单位疫苗奠定了坚实的基础。

关键词

猪A群轮状病毒 / VP8*蛋白 / 中和试验 / 多克隆抗体