稳定表达UL54蛋白的PK-15细胞株对UL54基因缺失重组伪狂犬病病毒复制效率的影响

摘要

UL54蛋白是伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)的非结构蛋白。电镜观察结果显示，多数UL54基因缺失的重组PRV(rPRV-ΔUL54)的病毒粒子仅有核衣壳，缺少完整的囊膜结构。病毒粒子结构的不完整导致病毒的感染效率显著降低，无法用于对UL54的基因功能及作用机制的研究。本研究将UL54基因克隆至慢病毒载体pLVX-IRES-Puro,经慢病毒转导后，PK-15细胞表达UL54蛋白。通过PCR、间接免疫荧光试验及蛋白质免疫印迹法进行鉴定，成功构建了过表达UL54蛋白的细胞株(PK-15-UL54)。在PK-15-UL54细胞株中接种UL54基因缺失病毒(rPRV-ΔUL54-Re)后，检测其复制情况。电子显微镜观察显示，rPRV-ΔUL54-Re病毒具有完整的病毒粒子结构；荧光显微镜观察结果表明，rPRV-ΔUL54-Re病毒能够正常感染细胞并进行复制；定量PCR检测结果表明，rPRV-ΔUL54-Re病毒的复制效率有所提高。因此，PK-15-UL54细胞株是提高UL54基因缺失重组PRV复制效率的重要工具，可在探究UL54基因调控PRV复制机制的研究中发挥重要作用。

关键词

伪狂犬病病毒 / 慢病毒载体 / UL54基因 / PK-15细胞