裂谷热病毒Gn蛋白D Ⅱ-Ⅲ的表达与间接ELISA抗体检测方法的建立

摘要

利用大肠杆菌表达系统表达裂谷热病毒(Rift Valley fever virus, RVFV) Gn蛋白Ⅱ-Ⅲ结构域的重组蛋白作为包被抗原，建立检测RVFV抗体的间接ELISA方法。将RVFV Gn蛋白Ⅱ-Ⅲ结构域基因序列克隆至pET-30a (+),构建重组质粒pET-RVFV Gn-DⅡ-Ⅲ,并将其转化至DE3 (BL21)感受态细菌，用IPTG诱导表达重组Gn-DⅡ-Ⅲ蛋白。以纯化的重组蛋白作为包被抗原，SPA-HRP为酶标二抗建立检测RVFV抗体的间接ELISA方法。Western blot鉴定结果证明RVFV Gn蛋白DⅡ-Ⅲ成功表达；进一步确定最佳诱导表达条件为0.8 mmol/L IPTG,37℃诱导5 h。利用亲和层析法纯化Gn-DⅡ-Ⅲ蛋白，纯度达91.9%,以纯化后蛋白作为包被抗原建立RVFV的间接ELISA抗体检测方法。特异性试验结果显示，该方法只能检测出RVFV阳性血清，与西尼罗病毒(West Nile virus, WNV)、埃博拉病毒(Ebola virus, EBOV)、马尔堡病毒(Marburg virus, MARV)和蜱传脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus, TBEV)阳性血清均无交叉反应。敏感性试验结果显示，RVFV Gn-DⅢ-Ⅲ阳性血清稀释至6 400倍时检测结果仍为阳性，表明该方法具有良好的敏感性。重复性试验结果显示，批内和批间反应的变异系数均小于10%,表明该方法具有良好的重复性。本研究利用表达与纯化的Gn-DⅡ-Ⅲ蛋白作为包被抗原，建立了检测RVFV抗体的间接ELISA方法，为RVFV检测方法与新型疫苗的研发奠定了基础。

关键词

裂谷热病毒 / 原核表达 / Gn-DⅡ-Ⅲ蛋白 / 间接ELISA