扎伊尔型埃博拉病毒GP1蛋白的多克隆抗体制备及间接ELISA检测方法的建立

摘要

旨在建立一种检测扎伊尔型埃博拉病毒(Zaire Ebola virus, ZEBOV)特异抗体的间接酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)方法。以ZEBOV GP基因全长为模板，利用PCR扩增GP1基因，克隆至pET-30a(+)载体，利用大肠杆菌表达系统表达并纯化GP1蛋白。纯化后的蛋白作为包被抗原，通过棋盘法确定抗原包被质量浓度及血清稀释度等条件，建立ZEBOV抗体间接ELISA检测方法，并对建立的ELISA检测方法进行特异性、敏感性、重复性评价。结果显示，原核表达成功制备GP1蛋白，将其作为间接ELISA包被抗原，通过优化反应条件，确定抗原最佳包被质量浓度为0.5 g/L,血清最佳稀释度为1∶3 200,酶标二抗最佳稀释度为1∶20 000,且该方法具有优异的特异性、敏感性以及重复性。结果表明，本试验利用大肠杆菌表达系统成功表达并纯化出高纯度的GP1蛋白，建立基于ZEBOV糖蛋白GP1抗体间接ELISA检测方法，该检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好，为进一步研究GP1生物学功能以及检测血清中ZEBOV抗体检测提供了技术支持。

关键词

埃博拉病毒 / 原核表达 / GP1蛋白 / 多克隆抗体 / 间接ELISA