犬幽门螺杆菌荧光定量PCR检测方法的建立及应用

任前乐; 杨占清; 李进军; 郭斌; 李小琼

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.06.13

中国兽医学报 ›› 2025, Vol. 45 ›› Issue (06) : 1202 -1209. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.06.13

犬幽门螺杆菌荧光定量PCR检测方法的建立及应用

任前乐, 杨占清, 李进军, 郭斌, 李小琼

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摘要

幽门螺杆菌(H.pylori)能够定植于人类和动物的胃黏膜，导致持续性感染、慢性炎症及组织损伤。为掌握犬H.pylori的流行情况，本试验针对H.pylori毒力基因vacA的1个独特区域设计了特异性引物，建立了检测H.pylori的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法，并对其特异性、敏感性和重复性进行了评估。结合常规PCR和H.pylori粪便抗原检测法(HpSA),对杭州市中心城区宠物犬H.pylori感染情况进行了流行病学调查。结果显示，标准品在3.26×10～6～3.26×10～1 copies/μL浓度区间内具有良好的线性关系，能特异性检测H.pylori,最低检测限为3.26×10～1 copies/μL,批内和批间变异系数分别为0.84%～1.87%和0.96%～1.93%。应用此方法检测2023-2024年杭州地区的犬粪便样本，H.pylori的总阳性率为25.21%。相比之下，常规PCR和HpSA的检出率分别为10.68%和8.97%。结果表明，我们建立的荧光定量PCR方法适用于犬H.pylori感染的检测，是一种快速、灵敏、特异且重复性良好的定量检测方法。此外，这项调查证实了家庭犬H.pylori感染的严重程度。鉴于H.pylori的广泛传播及其潜在人兽共患风险，建议实施风险沟通和持续的区域监测计划，以保护人类和宠物的健康。