旋毛虫TsNas36蛋白的表达和生物学特性分析

摘要

旋毛虫Nas-36(TsNas36)是一种在旋毛虫排泄分泌产物(excretory secretory products, ESP)中发现的锌金属蛋白酶家族成员。本研究通过克隆表达TsNas36基因，鉴定其生物学特性和时空表达特征，为探索TsNas36基因的生物学功能提供理论和材料基础。生物信息学分析显示，TsNas36全长470 AA,分子量约为54.69 kDa,无跨膜区，有一个信号肽(1-20 AA),一个虾红素蛋白酶(Astacin)结构域(116-320 AA)和一个CUB结构域(355-470 AA),有5个活性位点残基分别位于216(His)、217(Glu)、220(His)、226(His)和275(Tyr)位氨基酸。通过构建重组表达质粒pET-28a(+)/TsNas36,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达，获得重组蛋白rTsNas36。使用纯化后的重组蛋白免疫家兔获得抗rTsNas36多克隆抗体血清，间接ELISA结果显示其抗体效价达到1∶10～5。qRT-PCR和Western-blot结果显示，TsNas36在新生幼虫(NBL)时期的转录水平显著高于成虫和肌幼虫时期。免疫荧光结果表明，TsNas36仅定位于新生幼虫虫体表皮。综上，本研究表征了TsNas36基因的生物学特征，并发现该基因的表达具有高度的时期特异性，可能参与新生幼虫的发育进程。

关键词

旋毛虫 / 虾红素蛋白酶 / 锌金属蛋白酶 / TsNas36蛋白 / 原核表达 / 免疫荧光