PEDV RBD蛋白多肽抗体的制备与鉴定

俞佳钰, 姜宇航, 张国庆, 伊立超, 张爽, 李乐天, 秦爱建, 李昌

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.07.01

中国兽医学报 ›› 2025, Vol. 45 ›› Issue (07) : 1357 -1365. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.07.01

PEDV RBD蛋白多肽抗体的制备与鉴定

俞佳钰, 姜宇航, 张国庆, 伊立超, 张爽, 李乐天, 秦爱建, 李昌

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摘要

根据猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea, PEDV)氨基酸序列(GenBank登录号：AKN45969.1)筛选针对受体结合结构域(receptor binding domain, RBD)的表位抗原，制备PEDV RBD多克隆抗体并进行鉴定。采用生物信息学分析软件对PEDV RBD潜在抗原表位进行预测，并与猪冠状病毒属毒株进行序列比对，筛选的优势抗原表位与血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin, KLH)载体蛋白进行偶联后直接合成多肽抗原，然后免疫小鼠制备相应的特异性抗体，并应用Western blot技术和间接免疫荧光技术(IFA)鉴定抗体的特异性，间接ELISA方法测定抗体效价。结果显示，选择的PEDV RBD优势表位序列与其他18株PEDV毒株的序列相似性高达100%,与11株猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus, TGEV)病毒株(27.8%～29.3%)以及16株PDCoV病毒株(10.5%～13.4%)序列相似性低，说明该表位保守性良好。Western blot显示，制备的多肽抗体能特异性识别Expi293F细胞与杆状病毒系统过表达的PEDV RBD蛋白，同时抗体1∶2 000稀释后依然能够检测到PEDV感染Vero细胞表达的PEDV S蛋白，而与TGEV和PDCoV感染的ST细胞无反应，表明该多肽抗体特异性良好；ELISA检测小鼠血清中特异性抗体的效价最高可达1∶25 600。上述结果显示，利用生物信息学技术成功预测PEDV RBD蛋白抗原表位，制备了特异性的PEDV RBD多肽抗体。