伴侣蛋白促使溶血性曼氏杆菌PlpE蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达

摘要

为验证分子伴侣是否可以促使溶血性曼氏杆菌脂蛋白E(Pasteurella lipoprotein E,PlpE)在大肠杆菌中以可溶性形式表达及表达的蛋白是否具有活性，应用原核表达和Western blot方法进行检测，结果表明，溶血性曼氏杆菌PlpE蛋白原核表达载体pET-32a(+)-plpE以包涵体形式表达，改变诱导剂浓度、诱导时间以及温度均未改变其表达形式；将伴侣蛋白质粒pG-KJE8、pGro7、pKJE7和pG-Tf2分别与pET-32a(+)-plpE在大肠杆菌表达体系中共表达，当加入终浓度为0.5 mmol/L的IPTG以及0.5 g/L的L-阿拉伯糖或5.0μg/L的四环素作为诱导剂，37℃诱导8 h,结果显示，分子伴侣pGro7能使rp-PlpE以包涵体表达变为可溶性表达，pG-KJE8、pKJE7和pG-Tf2对rp-PlpE的表达形式没有影响；可溶性表达的rp-PlpE与溶血性曼氏杆菌阳性血清可发生特异性反应。因此，研究表明，与分子伴侣蛋白pGro7的共表达可以使rp-PlpE蛋白以可溶性形式表达，且纯化的蛋白具有反应原性，该研究结果可为建立溶血性曼氏杆菌亚单位疫苗及血清学诊断方法奠定基础。

关键词

分子伴侣 / 溶血性曼氏杆菌 / 脂蛋白E(PlpE) / 可溶性表达 / 原核表达系统