在蜱源性芽孢杆菌中产几丁质酶菌株的筛选及酶活性检测

摘要

几丁质酶降解几丁质的生物学活性受到广泛关注，尤其在生物防治方面具有潜在的应用价值。本试验从内蒙古呼伦贝尔地区采集的草原革蜱体内分离的4种蜱源性芽孢杆菌为试验材料，采用传统细菌培养法进行芽孢杆菌分离培养与鉴定，获取的纯培养物进行16S rRNA序列测序鉴定和遗传进化分析。再通过胶体几丁质平板筛选水解几丁质的菌株和PCR方法检测几丁质酶特异性基因，在发酵培养基中37.0℃培养4 d,取上清DNS方法检测其酶活性。结果显示，从草原革蜱组织样本中成功分离出4种革兰阳性芽孢杆菌菌株：溶蛋白芽孢杆菌、副霉菌芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌，依次重新命名为IMH/B-1株、IMH/P-1株、IMH/T-1株和IMH/C-1株；通过PCR方法检测出苏云金芽孢杆菌和溶蛋白芽孢杆菌的几丁质酶基因，而在蜡样芽孢杆菌和副霉菌芽孢杆菌中则未检出对应基因，但其中3株菌显著(P<0.01)降解胶体几丁质，即溶蛋白芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌。相继DNS检测试验结果发现，该3株菌的几丁质酶活力范围均在1.292～2.032 U/mL之间，其中溶蛋白芽孢杆菌的几丁质酶活力最高，为2.032 U/mL,蜡样芽胞杆菌和苏云金芽孢杆菌酶活力则分别为1.496和1.324 U/mL。本试验为产几丁质酶芽孢杆菌株的进一步开发应用研究奠定了基础。

关键词

芽孢杆菌 / 几丁质酶 / 酶学活性 / 蜱