携带荧光蛋白UnaG的口蹄疫病毒复制子系统的构建及其鉴定

摘要

为构建携带荧光蛋白(UnaG)的口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)亚基因组复制子系统，本研究以FMDV全长cDNA质粒为模板，通过双酶切去除FMDV的部分结构蛋白和非结构蛋白，应用表达绿色荧光蛋白UnaG的报告基因序列替换FMDV的部分结构蛋白基因序列，成功构建FMDV-UnaG复制子。经PCR和测序验证后，将线性化的FMDV-UnaG复制子转染至表达T7 RNA聚合酶的BSR/T7细胞，并采用荧光显微镜和激光共聚焦技术观测荧光信号。结果表明，构建的FMDV-UnaG复制子能够有效表达UnaG蛋白且该蛋白与FMDV的3A蛋白存在共定位现象。此外，通过Western blot和RT-qPCR也分别检测到该复制子RNA可以表达病毒的非结构蛋白并且在BSR/T7细胞中能够进行自主复制。总之，FMDV-UnaG亚基因组复制子的成功构建为后续深入研究FMDV的复制和翻译机制及发展疫苗载体等提供了有利工具。

关键词

UnaG / 口蹄疫病毒 / 复制子