黄芪多糖调控VEGF/VEGFR通路对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞增殖的影响

摘要

探究黄芪多糖（Astragalus polysaccharide, APS）是否通过调控VEGF/VEGFR影响大鼠肠黏膜微血管内皮细胞（rat intestinal mucosal microvascular endothelial cells, RIMMVECs）的增殖活性。从新生大鼠中分离RIMMVECs并进行纯化鉴定，随后稳定传代并以0.1、1.0、10.0、100.0、1 000.0和10 000.0 mg/L的APS处理RIMMVECs,应用MTT法研究APS对RIMMVECs增殖的影响并筛选APS最佳作用的质量浓度；利用流式细胞术检测细胞周期变化，评估APS对RIMMVECs细胞周期的作用阶段；用ELISA试剂盒检测细胞上清中VEGFA含量变化，评价细胞增殖诱导血管生成的潜力；用荧光显微镜观察Fluo-8AM负载的细胞内荧光强度变化，评估细胞内Ca²⁺水平；用蛋白免疫印迹（Western blot）法检测RIMMVECs中PERK蛋白表达水平，分析APS可能的作用机制。结果显示，100 mg/L APS显著增强RIMMVECs增殖活性，增加细胞上清中VEGFA含量，增加细胞Ca²⁺水平，升高细胞PERK蛋白表达量。表明APS具有促进RIMMVECs增殖的作用，该作用可能与促进细胞VEGFA表达以及激活ERK通路相关。

关键词

黄芪多糖 / 肠微血管内皮细胞 / 细胞增殖 / VEGFA / PERK / 大鼠