田基黄-夏枯草药对调控NF-κB-NLRP3通路改善肝损伤的作用及机制

摘要

基于网络药理学，通过分子对接与试验验证，探讨田基黄-夏枯草药对在肝损伤治疗中的作用机制。将小鼠随机分为空白组（CON组）、模型组（CCl₄组）、药物高剂量组（TXD-H组）和低剂量组（TXD-L组）,利用CCl₄诱导建立小鼠肝损伤模型，观察肝脏组织的病理形态，并测定血清中的谷草转氨酶（AST）和谷丙转氨酶（ALT）水平。通过TCMSP、PubChem、Swiss Target Prediction、Gene Cards、DisGeNET等数据库获取中药的活性成分及其靶点，取交集以获得药物的潜在作用靶点。进一步利用Cytoscape构建“药物-活性成分-交集靶点”网络图，使用STRING数据库对潜在靶点进行蛋白质相互作用（PPI）分析，并使用DAVID数据库对潜在靶点进行GO和KEGG分析。使用AutoDock Tools软件进行分子对接，以验证结果的可信性。最后，对分子对接结果进行验证，检测关键靶点基因、NLRP3炎症小体及焦亡相关基因的表达情况。动物试验结果显示，与CON组相比，CCl₄组小鼠血清AST和ALT活性均极显著提高（P<0.01）;而与CCl₄组相比，TXD-L组小鼠血清AST和ALT活性显著降低（P<0.05）,TXD-H组小鼠AST和ALT活性极显著降低（P<0.01）。通过网络药理学筛选出135个潜在靶点，根据degree值，筛选出排名靠前的主要成分为四甲基木犀草素、槲皮素、山奈酚、木犀草素和桑色素，关键靶点为TNF、SRC、AKT1、EGFR和ESR1。GO功能富集分析得到304个条目，KEGG富集分析得到91条生物通路。分子对接结果显示，田基黄-夏枯草药对的主要成分与关键靶点之间的结合能力较强。qPCR结果显示，与CON组相比，CCl₄组SRC、EGFR、TNF-α、AKT1、IL-18的mRNA相对表达量均呈上升趋势，MyD88、NF-κB、IL-1β、NLRP3、Caspase-1、ASC的mRNA相对表达量显著升高（P<0.05）,TLR4与GSDMD的mRNA相对表达量极显著升高（P<0.01）。而与CCl₄组相比，TXD-H组EGFR、AKT1、TLR4、IL-1β、GSDMD的mRNA相对表达量极显著降低（P<0.01）,TNF-α、MyD88、NF-κB、NLRP3、ASC的mRNA相对表达量显著降低（P<0.05）,SRC、IL-18、Caspase-1的mRNA相对表达量呈下降趋势。结果表明，田基黄-夏枯草药对通过多成分、多途径发挥保肝脏作用，其中抑制NF-κB-NLRP3通路减少肝脏细胞焦亡，可能是其发挥保护作用的重要途径之一。

关键词

夏枯草 / 田基黄 / 网络药理学 / 肝损伤 / 作用机制 / 焦亡 / 小鼠