SIRT2对冷处理后小鼠肝脏组织紧密连接及内质网应激的影响

摘要

为了探明SIRT2对冷处理后小鼠肝脏组织紧密连接及内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)的影响，选取5周龄雄性C57BL/6型小鼠和SIRT2敲除型小鼠各10只，随机分为野生型室温对照组(WT Control)、野生型冷处理组(WT Cold)、SIRT2敲除+室温对照组(KO Control)和SIRT2敲除+冷处理组(KO Cold)。室温对照组小鼠在温度为(24±2)℃的环境中饲养，冷处理组置于(4±2)℃人工气候室中每天随机刺激3 h,连续刺激3周。采用H&E、Masson染色以及透射电镜观察小鼠肝脏组织显微及超微结构；通过生化分析仪检测小鼠血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)浓度；利用Western blot试验对肝脏组织中紧密连接相关(Claudin1、Occludin)、ERS相关蛋白(GRP78、CHOP、XBP1、p-eIF2α、eIF2α)和促炎细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)的表达量进行检测。结果显示，与WT Control组相比，WT Cold组与KO Control组小鼠肝小叶结构不清，肝索排列紊乱，胞质松散，出现白色空泡，少量胶原沉积和纤维增生，肝脏细胞中线粒体轻度肿胀，内质网(endoplasmic reticulum, ER)分布不均，血清中AST及ALT的浓度升高(P<0.050、P<0.010),肝脏组织中Occludin、Claudin1的表达量降低(P<0.050、P<0.010、P<0.001),GRP78、CHOP、XBP1、p-eIF2α/eIF2α、TNF-α、IL-6和IL-1β的蛋白表达量升高(P<0.050、P<0.010、P<0.001);与KO Control组相比，KO Cold组小鼠肝脏组织出现大量白色空泡、少量气球样变、炎性细胞浸润以及明显的胶原沉积和纤维增生，肝脏细胞中线粒体肿胀，线粒体嵴减少，ER增粗，血清中AST及ALT浓度升高(P<0.010),肝脏组织中Occludin、Claudin1的蛋白表达量降低(P<0.010),GRP78、CHOP、XBP1、p-eIF2α/eIF2α、TNF-α、IL-6和IL-1β的蛋白表达量升高(P<0.050、P<0.010、P<0.001)。结果表明，SIRT2敲除会加重冷处理所导致的小鼠肝脏组织紧密连接受损，诱导ERS,并进一步促进炎症反应的发生。

关键词

SIRT2 / 肝脏 / 冷处理 / 紧密连接 / 内质网应激 / 小鼠