BHB通过ROS-NLRP3途径抑制奶牛CD14⁺单核细胞吞噬功能

摘要

旨在探究β-羟丁酸（β-hydroxybutyric acid, BHB）是否通过活性氧（reactive oxygen species, ROS）-NLRP3（NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3）途径抑制奶牛CD14⁺单核细胞的吞噬功能。提取产后健康奶牛血液中CD14⁺单核细胞进行培养，转染沉默NLRP3小干扰RNA后加入3 mmol/L的BHB;用10 nmol/L NLRP3抑制剂MCC950（CP-456773）或10 mmol/L的ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸（N-acetyl cysteine, NAC）预处理单核细胞后再添加3 mmol/L的BHB处理24 h。通过免疫印迹法检测NLRP3蛋白表达水平；采用流式细胞术和免疫荧光测定单核细胞的吞噬能力。结果显示，si-NLRP3+BHB处理组与si-Control+BHB组相比，单核细胞吞噬功能显著升高，而NLRP3蛋白表达量显著降低。与DMSO+BHB组相比，MCC950+BHB组的单核细胞吞噬功能明显升高。此外，与DMSO+BHB组相比，MCC950+BHB处理组单核细胞中的NLRP3蛋白表达显著降低。与PBS+BHB组相比，添加ROS清除剂NAC处理后，单核细胞吞噬能力明显升高，而NLRP3蛋白表达量显著降低。结果表明，BHB通过ROS-NLRP3途径抑制奶牛CD14⁺单核细胞的吞噬功能。因此，调控NLRP3炎症小体的活化可能是改善围产期奶牛单核细胞吞噬功能障碍的有效方法。

关键词

BHB / NLRP3炎症小体 / CD14⁺单核细胞 / 吞噬功能 / 奶牛