PDCoV N蛋白原核表达与多克隆抗体的制备

摘要

将猪δ冠状病毒（PDCoV） N蛋白基因优化后连接至pET-30a载体上，获得pET-30a-N质粒，热激法将其转入3株BL21大肠杆菌进行表达，探究蛋白表达的条件，并应用Ni Focurose 6FF（IMAC）纯化蛋白。以纯化后蛋白作为抗原免疫新西兰白兔，获得了PDCoV N蛋白多抗，并利用间接ELISA方法鉴定抗体效价及Western blot和间接免疫荧光（indirect immunofluorescence, IFA）鉴定抗体的特异性。结果显示，pET-30a-N质粒在BL21 Star^TM（DE3）中表达水平较高，且最佳表达条件为37℃4 h;纯化后目的蛋白纯度可达90.3%,间接ELISA结果显示抗体效价可达1∶204 800;IFA和Western blot检测表明制备出的兔多克隆抗体具有良好特异性，并可特异性检测PDCoV的感染。结果表明，本试验制备出特异性识别PDCoV N蛋白的多克隆抗体，为后续探究PDCoV N蛋白的功能提供了一些参考，为建立PDCoV诊断方法奠定了基础。

关键词

PDCoV / N蛋白 / 原核表达 / 多克隆抗体