SSR4蛋白特征的分析及其与猪非典型瘟病毒云南株Mut蛋白的互作

摘要

为了研究猪非典型瘟病毒(atypical porcine pestivirus, APPV)云南株关键变异基因(APPV-YN-Mut)蛋白与宿主蛋白信号序列受体蛋白4(signal sequence receptor subunit 4,SSR4)之间是否存在直接相互作用，利用ProtParam、PredictProtein、TMHMM等在线软件对SSR4基因表达蛋白的理化性质、空间结构、亚细胞定位等进行分析预测；通过构建重组载体pCMV-Tag4A-SSR4和pET-GST-Mut在体外进行GST pull-down试验；构建重组载体pBiFC-VN173-SSR4和pBiFC-VC155-Mut在细胞内进行双分子荧光互补试验(BiFC),验证APPV-YN-Mut与宿主蛋白SSR4之间是否存在体外和细胞内的直接相互作用。结果显示，SSR4蛋白是疏水性稳定蛋白，无跨膜结构，有信号肽，二级结构主要以无规则卷曲为主，三级结构稳定，主要位于内质网中；GST pull-down和BiFC试验结果显示，APPV-YN-Mut与宿主蛋白SSR4在体外和细胞内都存在直接相互作用。

关键词

猪非典型瘟病毒 / 蛋白互作 / 双分子荧光互补 / GST pull-down