阿卡斑病毒RPA-LFD检测方法的建立及临床应用

摘要

基于阿卡斑病毒(Akabane virus, AKAV)S片段设计特异性引物和探针，并添加相应的基团将重组酶聚合酶等温扩增(recombinase polymerase amplification, RPA)与侧流层析试纸(lateral flow dipstick, LFD)相结合，通过对反应的温度、时间、引物及探针浓度进行优化，建立检测AKAV的RPA-LFD方法，并对其特异性、灵敏性和临床应用的可靠性进行评价。结果显示，该方法在37℃条件下反应20 min,即可在LFD试纸上读取检测结果，对蓝舌病病毒、牛多杀性巴氏杆菌、牛传染性鼻气管炎病毒和牛支原体均无交叉反应，最低可检出2.5×10～0拷贝/μL的标准质粒；临床样本检测结果与RT-PCR方法完全一致。结果表明，本试验所建立的RPA-LFD方法具有特异性好、灵敏度高、操作简便和可视化等优点，能够应用于临床检测，为AKAV的迅速确诊及防控提供新的技术支持。

关键词

阿卡斑病毒 / 重组酶聚合酶等温扩增 / 侧流层析试纸 / 检测方法