检测阿卡斑病毒N蛋白抗体的双抗原夹心ELISA方法的建立及应用

摘要

利用原核表达系统从上清中获得浓度高、纯度好的重组阿卡斑病毒(Akabane virus, AKAV)N蛋白；通过免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，运用间接ELISA和Western blot测定多克隆抗体效价。结果显示，多克隆抗体效价为1∶8.192×10～7,并具有较好的反应性；通过优化反应条件，建立了检测AKAV抗体的双抗原夹心ELISA,该方法可检测牛、羊等多种动物血清中AKAV抗体；与蓝舌病毒(blue tongue virus, BTV)、鹿流行性出血热病毒(epizootic hemorrhagic disease virus of deer, EHDV)、牛肠道病毒(bovine enterovirus, BEV)和猪伪狂犬病病毒(porcine pseudorabies virus, PRV)阳性血清均无交叉反应；批内、批间重复性试验变异系数均小于10%;与AKAV阻断ELISA试剂盒相比，敏感性高8～16倍，符合率为93.33%,结果一致性κ系数为0.864。结果表明，建立的双抗原夹心ELISA方法灵敏、特异、可重复性高，为AKAV抗体检测及防控提供了技术支持。

关键词

阿卡斑病毒 / 阿卡斑病 / N蛋白 / 多克隆抗体 / 双抗原夹心ELISA