表达猫杯状病毒VP1蛋白的重组猫疱疹病毒的构建与鉴定

摘要

以猫疱疹病毒Ⅰ型（feline herpesvirus 1,FHV-1）为载体，采用CRISPR/Cas9技术和同源重组技术将FHV-1的gI和gE基因替换为猫杯状病毒（feline calicivirus, FCV）VP1基因和红色荧光蛋白（mCherry）基因，拯救获得重组病毒FHVΔgI&gE/VP1-mCherry⁺,经空斑纯化重组病毒；利用间接免疫荧光试验、空斑形态学分析及PCR鉴定分析重组病毒的生物学特性和遗传稳定性。间接免疫荧光鉴定结果显示，重组病毒FHVΔgI&gE/VP1-mCherry⁺能够在F81细胞中表达VP1蛋白，且重组病毒的生长特性与亲本病毒FHV-1无明显差异；空斑形态观察及染色结果显示，重组病毒形成的空斑面积小于亲本病毒，表明缺失gI、gE基因后重组病毒在细胞间扩散能力降低；PCR鉴定结果显示，重组病毒连续传代15代仍能检测到VP1基因，表明重组病毒具有良好的遗传稳定性。结果表明，成功构建了表达FCV VP1蛋白的重组猫疱疹病毒，为FCV、FHV-1二联基因工程疫苗的研制奠定了基础。

关键词

猫杯状病毒 / 猫疱疹病毒Ⅰ型 / 猫杯状病毒VP1蛋白 / 重组猫疱疹病毒 / 生物学特性