MOV10敲除N2a细胞系的构建及其对弹状病毒科病毒复制的影响

柳永赛; 宋雨濛; 白玉洁; 黄培; 李媛媛; 张海丽; 王化磊

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.08.10

中国兽医学报 ›› 2025, Vol. 45 ›› Issue (08) : 1657 -1664. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.08.10

MOV10敲除N2a细胞系的构建及其对弹状病毒科病毒复制的影响

柳永赛, 宋雨濛, 白玉洁, 黄培, 李媛媛, 张海丽, 王化磊

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摘要

通过CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeat/CRISPR-associated protein 9)基因编辑技术构建莫洛尼白血病病毒10(Moloney leukemia virus 10,MOV10)基因敲除(MOV10 gene knockout, MKO)小鼠神经瘤母细胞(neuro 2a, N2a)细胞系。首先，构建表达MOV10基因特异性向导RNA(single guide RNA,sgRNA)的重组质粒pMD18T-U6-sgRNA,随后将pMD18T-U6-sgRNA与pMJ920-Cas9-eGFP共转染至N2a,通过流式细胞术筛选获得单克隆细胞株，并在分子水平进行MOV10敲除试验验证。结果显示，MKO N2a细胞系具有正常的细胞活性和细胞增殖能力；使用弹状病毒科经典病毒狂犬病病毒(rabies virus, RABV)和水疱口炎病毒(vesicular stomatitis virus, VSV)对MKO N2a细胞系进行感染试验，结果显示弹状病毒科病毒在MKO N2a细胞系中复制水平显著增强。结果表明，本研究成功构建了1株MKO N2a细胞系，为MOV10生物学功能和抗病毒机制的探究以及为以RABV/VSV为载体的重组病毒载体疫苗的研发提供了前期基础。