核糖体蛋白S11在毕赤酵母中的分泌表达及其对黑色素瘤的治疗作用

摘要

采用毕赤酵母系统对粪肠球菌核糖体蛋白S11(ribosomal protein S11,RPS11)进行异源表达。通过优化RPS11基因序列以适应酵母的密码子偏好，构建重组表达载体pPIC9K-RPS11;采用电击法将其转化至毕赤酵母GS115菌株，并通过G418抗性筛选获得高拷贝重组菌株；采用甲醇诱导蛋白表达，并通过SDS-PAGE验证了表达效果；将重组蛋白应用于小鼠黑色素瘤治疗模型，以分析其治疗效果。结果显示：重组表达载体pPIC9K-RPS11成功在毕赤酵母中表达了相对分子质量约为14 kDa的目的蛋白；发酵条件为摇瓶诱导温度30℃、诱导时间72 h、甲醇浓度为1%;小鼠腹腔巨噬细胞驯化免疫模型分析表明，重组RPS11具有诱导驯化免疫的生物学活性；小鼠黑色素瘤模型的治疗试验显示，重组RPS11能够显著抑制肿瘤生长。结果表明，毕赤酵母分泌表达的重组RPS11不仅具有诱导驯化免疫的生物学活性，而且对小鼠黑色素瘤具有抑制肿瘤细胞生长的作用，这为异源表达重组RPS11及其进一步应用提供了理论依据。

关键词

毕赤酵母 / 核糖体蛋白S11 / 驯化免疫 / 肿瘤