基于免疫磁珠检测猪流行性腹泻病毒的一步RT-qPCR方法的建立及初步应用

杨顺利; 吕小娟; 李丽; 张晓晴; 方玉鹏; 赵天; 夏继桥; 张杰; 付志新; 刘永生

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.09.01

中国兽医学报 ›› 2025, Vol. 45 ›› Issue (09) : 1817 -1823. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.09.01

基于免疫磁珠检测猪流行性腹泻病毒的一步RT-qPCR方法的建立及初步应用

杨顺利, 吕小娟, 李丽, 张晓晴, 方玉鹏, 赵天, 夏继桥, 张杰, 付志新, 刘永生

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摘要

以羧基化修饰的磁珠和抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)M蛋白双价纳米抗体偶联构建免疫磁珠(IMNBs-Ⅱ),利用PEDV细胞毒,验证了其PEDV捕获和富集功能,结合IMNBs-Ⅱ的特征和反转录荧光定量聚合酶链反应(RTqPCR)的检测优势,建立了针对PEDV的一步RT-qPCR检测方法。特异性分析发现,该方法与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒等均无交叉反应,表明其具有较好的特异性;灵敏性分析发现,与传统的RT-qPCR方法相比,基于IMNBs-Ⅱ的RT-qPCR方法的检测敏感性提高了10倍。对临床样品检测证实,基于IMNBs-Ⅱ的RT-qPCR方法适用于临床粪便和组织样品的快速、准确检测。本研究建立的方法有效避免了核酸提取过程中的污染问题、简化了试验操作步骤、节省了检测时间,为PEDV高效检测提供更好的选择。