JEV、PRRSV和CSFV TaqMan三重RT-qPCR方法的建立与应用

张力; 汤德元; 曾智勇; 王彬; 袁盛林; 陈旭; 廖正波; 周飘; 何松; 毛茵茗; 胡雯雯; 周敏; 高邡鑫

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.09.02

中国兽医学报 ›› 2025, Vol. 45 ›› Issue (09) : 1824 -1833. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2025.09.02

JEV、PRRSV和CSFV TaqMan三重RT-qPCR方法的建立与应用

张力, 汤德元, 曾智勇, 王彬, 袁盛林, 陈旭, 廖正波, 周飘, 何松, 毛茵茗, 胡雯雯, 周敏, 高邡鑫

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摘要

为建立鉴别日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)和猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的TaqMan三重RTqPCR检测方法,本研究参照NCBI GenBank中已公开的JEV E、PRRSV ORF6和CSFV E2保守序列,设计并合成3对特异性引物和探针,通过对反应体系以及反应程序的优化,建立检测3种病毒的多重RT-qPCR方法,并将其应用于临床样品的检测。结果显示,建立的TaqMan三重RT-qPCR能特异性扩增出JEV、PRRSV和CSFV的基因片段,而不能扩增其他非目的基因,表明建立的方法特异性良好。组内和组间重复试验结果显示,其Cv值均低于3%,表明所建立的方法具有良好的重复性。敏感性试验结果显示,对3种病毒的重组质粒的最低检测量均为100拷贝/μL。应用该方法对贵州省26个猪场的血液、流产死胎、精液和病死猪等总计969份样品进行检测JEV检出率为34.3%(332/969)、PRRSV检出率为28.3%(274/969)、CSFV检出率为19.8%(192/969)。JEV与PRRSV的混合感染检出率为10.1%(98/969),JEV与CSFV的混合感染检出率为12.1%(117/969),CSFV与PRRSV的混合感染检出率为14.6%(141/969),而JEV、PRRSV和CSFV的三重混合感染检出率为7.9%(77/969)。上述结果显示,本研究成功构建了JEV、PRRSV和CSFV TaqMan三重RT-qPCR检测方法,可适用于猪场对这3种病毒的检测,为鉴别病毒引起的繁殖障碍性疫病提供了技术支持。