检测猪瘟病毒E^rns蛋白抗体的双抗原夹心化学发光方法的建立

摘要

为建立一种特异性强、灵敏度高、操作高效便捷的检测猪瘟病毒（classical swine fever virus,CSFV） E^rns蛋白抗体的方法,以便鉴别E2亚单位疫苗免疫和流行毒株感染的抗体。本研究利用昆虫杆状病毒表达系统表达纯化的E^rns蛋白为偶联抗原,分别与偶联固相载体—羧基磁珠和辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase,HRP）,对各反应参数进行优化,建立基于全自动化学发光分析仪检测E^rns蛋白抗体的双抗原夹心化学发光酶免疫方法（chemiluminescent enzyme immunoassay,CLEIA）,并利用该方法对流行毒株感染血清以及猪瘟E2亚单位疫苗免疫攻毒猪血清进行了定量检测。结果显示,用于建立双抗原夹心化学发光酶免疫方法的最佳缓冲液pH值为8.0,最佳蛋白偶联量为2.5 mg/g,最佳封闭液为10%BSA溶液,血清加样量为20μL,酶标抗原最佳稀释度为1:500,一步反应时间为15 min;建立的检测CSFV E^rns蛋白抗体的双抗原夹心化学发光酶免疫方法的阴性、阳性临界点为5.83 U/mL,诊断灵敏度为1:128,该方法与非洲猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、猪流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪传染性胃肠炎病毒阳性血清均无交叉反应。重复性试验的批内变异系数为0.77%～11.56%,批间变异系数为10.30%～14.55%,均<15%。与商品化CSFV E^rns蛋白抗体检测试剂盒的阳性样品符合率为95.24%,阴性样品符合率为92.71%,总符合率达到93.23%。本研究建立的CSFV E^rns蛋白抗体检测的双抗原夹心化学发光方法具有较高的灵敏度和良好的重复性,可实现自动化检测,适用于猪瘟E2亚单位疫苗免疫和流行毒株感染的血清学鉴别。

关键词

猪瘟病毒 / E^rns蛋白 / 蛋白表达 / 化学发光检测方法