口蹄疫病毒O型中和单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定

摘要

口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus,FMDV）不同血清型间没有交叉免疫保护作用,但动物在疫苗免疫后所产生的不同血清型抗体存在交叉反应,为制备抗O型FMDV的中和单克隆抗体,建立一种基于mAb区分（）型与A型FMDV抗体的方法。采用灭活的O型FMDV免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,在大肠杆菌中表达了一系列GST融合重叠肽和截短肽,确定单抗识别的抗原表位,利用阻断ELISA检测了已知背景的O型和A型FMDV阳性血清、阴性血清各20份,验证筛选单抗在诊断中的可行性。结果显示,共获得5株单克隆抗体;Western blot和间接荧光免疫试验（IFA）结果显示,这5株单抗只与（）型FMDV反应,不与A型FMDV反应;病毒微量中和试验（VNT）结果显示这5株单抗均对FMDV/O/MY98/GZBY/2013有中和能力;5株单抗识别同一表位,最小识别表位为¹⁴⁵RGDLQVLA¹⁵²,其中Arg¹⁴⁵和Gln¹⁴⁹为关键氨基酸,序列比对发现该表位在大部分O型FMDV毒株中是保守的,而在所有的A、Asia 1和SAT1～3型FMDV毒株中Gln¹⁴⁹都发生突变;阻断ELISA结果显示mAb-8C5 D3可以区分O型和A型抗体。

关键词

口蹄疫病毒 / 血清型 / VP1 / 中和抗体 / 表位鉴定